用ALDHbr测定试剂盒对CB单核细胞（106个细胞/ mL）染色，并在配备有488nm和625nm激光器的流式细胞仪上分析，用于检测ALDEFLUOR TM（BAA），7-AAD，APC，PE和PE-花菁荧光。 如上所述，使用完全染色的样品（样品）显示鉴定（A）7-AAD-GlyAB-CD45 + ALDHbrCD34 +细胞。（B）DEAB阴性对照样品（阴性对照）的染色用于ALDHbr设门。 注意：如果在用ALDEFLUOR™染色之前首先从CB样品中除去红细胞（RBC），ALDHbr细胞设门大大简化。 ErythroClear™红细胞去除试剂盒（货号#01739）专为从多达16个小体积CB样品中去除红细胞而设计。

每个样品的一半用ALDHbr分析试剂盒染色并分析，如图1所示。确定每个样品中7-AAD-GlyAB-CD45 +细胞群中（A）CD34 +，（B）ALDHbr和（C）ALDHbrCD34 +细胞的百分比。 使用MethoCult Classic H4434培养基（货号#04434）将每个另一半样品铺板于CFU测定中，14天后计数菌落。 每个样品的CFU比例计算活有核细胞（TNCs）的百分比。 （D）中的表格显示了来自每个含有1个CFU的亚群的细胞数。 数据显示ALDHbrCD34 +细胞比例与功能祖细胞的比例（R2：相关系数）高度相关。

如所述（图1），将CB单个核细胞（10e6个细胞/ mL）染色并分析。 显示的是7-AAD-GlyAB-CD45 +群体中CD34 +，ALDHbr和ALDHbrCD34 +细胞的百分比。 每列代表平均值±S.D. 对每个CB样品进行三次重复测定（n = 7）。

将单个CB单个核细胞样品（10e6个细胞/ mL）分成3份，分别用ALDHbr分析试剂盒（参见图1的流程）分别染色并分别在三种不同的流式细胞术仪器上分析; FACScan DXP6，FACSCalibur和Accuri C6。 所有仪器都配备了488 nm和635 nm激光器，用于检测ALDEFLUOR™（BAA），7-AAD，APC，PE和PE-Cyanine5荧光。 测定每个样品中ALDHbrCD34 +细胞的比例作为每个仪器测量的7-AAD-GlyAB-CD45 +细胞群体的百分比。 这些流式细胞仪测量的ALDHbrCD34 +细胞的数量没有显著差异（p> 0.05）。 每列代表平均值±S.D. 在每个流式细胞仪上评估分析的CB样品的三次重复。

ALDEFLUOR™试剂

ALDEFLUOR™DEAB试剂

ALDEFLUOR™分析缓冲液

2N HCl

DMSO

7-AAD Viability Dye

Anti-Human CD45 Antibody, Clone HI30, PE

Anti-Human CD34 Antibody, Clone 581, APC

Anti-Human CD235ab (Glycophorin AB) Antibody, Clone HIR2, PE-Cyanine5