CloneR™-Bio-Rad-Bio-Rad伯乐代理官网-伯乐抗体-伯乐层析Aminex色谱柱

CloneR™

2024-10-15

CloneR™

货号：05888

规格：10 mL

价格：808

产品类型：多能干细胞培养

品牌：STEMCELL Technologies

CloneR™ 成份明确，不含血清，设计用于增加人ES细胞和iPS的克隆效率和单细胞存活率。CloneR™是10X的添加物，可添加于mTeSR™1或TeSR™-E8™中，显著性提高hPSC在低密度培养单克隆时的克隆效率及细胞胞存活率（适用于低密度克隆密度铺板（10cm板子中1-25细胞/cm2）和单细胞铺板（96孔板每孔一个细胞），尤其是针对采用CRISPR/Cas9技术进行基因编辑的客户（因为CRISPR/Cas9技术需要从hPSC单细胞生成克隆）。

优点：

- 高效。以低密度或克隆密度培养hPSC时，增加细胞的存活率。 - 简便。无需驯化细胞适应单细胞传代。 - 灵活。与任何一款TeSR™系列的培养基和您所选择的细胞培养基质兼容。 - 显著。可提高多种人ES和iPS细胞系的克隆效率。 - 成分确定。无血清、无饲养层。

数据：

图1. 用CloneR™进行hPSCs单细胞克隆的工作流程第0天，将hPSC以单细胞克隆密度（例如25个细胞/cm2）进行接种，或在96孔板中每孔沉积1个细胞。使用的培养基为添加了CloneR™的mTeSR™1（#85850）或 TeSR™-E8™（#05940）。第2天，向细胞中加入含有CloneR™添加物的TeSR™培养基。从第4天开始细胞在不含CloneR™的TeSR™培养基中维持培养。在10-14天之内挑选克隆。克隆细胞系可以在TeSR™培养基中进行长期维持培养。我们建议使用如上图所示的培养皿。图2. CloneR™增强了hPSCs的克隆效率且兼容多种hPSC细胞系和铺板流程与接种到含有ROCK抑制剂（10μM Y-27632）的TeSR™中的细胞相比，接种到添加了CloneR™的TeSR™中的hPSCs克隆效率显著提高。hES（H1和H7）和 hiPS（WLS-1C和STiPS-M001）细胞以（A）克隆密度（25个细胞/cm2）接种到mTeSR™1或TeSR™-E8™中或（B）通过使用FACS的单个细胞沉积 (以单个细胞每孔) 接种在mTeSR™1中。图3. CloneR™增强了在低接种密度下hPSCs的克隆效率与接种到含有ROCK抑制剂（10μM Y-27632）的mTeSR™1中的细胞相比，接种到添加了CloneR™的mTeSR™1中的hPSCs克隆效率显著提高。图示为在12孔板的单个孔内的克隆，在第七天经碱性磷酸酶染色的典型图片。H1 hES细胞以克隆密度(每孔100细胞, 25细胞/cm2)接种到添加（A）ROCK抑制剂或（B）CloneR™的mTeSR™1中，基质为Vitronectin XF™。图4. 使用CloneR™可得到更大的单细胞来源的集落与含有ROCK抑制剂（10μM Y-27632）的mTeSR™1相比，hPSCs在添加了CloneR™的mTeSR™1中培养后形成的集落更大。图示为在添加了（A）ROCK抑制剂或（B）CloneR™的mTeSR™1中培养七天后的hPSC集落的代表性图像图5. 使用CloneR™建立的克隆性细胞系具有hPSC的特征性形态在添加了CloneR™的mTeSR™1或者TeSR™-E8™培养基中建立的克隆性细胞系保持了hPSC的特征：明显的核仁和高核质比。图示为源于（A）H1 hES细胞系和（B）WLS-1C hiPS细胞系的克隆在传代7次后的代表性图像。

图6. 使用CloneR™建立的克隆性细胞系表达高水平的未分化细胞标志物使用添加了CloneR™的mTeSR™1所建立的hPSC克隆性细胞系表达与亲代细胞系相似的未分化细胞标志物OCT4（货号 #60093）和TRA-1-60（货号 #60064）。使用（A）H1 hES 细胞系（B）WLS-1C hiPS 细胞系建立的克隆性细胞系。数据为克隆细胞后将细胞传至5到7代间的平均值（mean ± SEM; n = 2）。

图7. 使用CloneR™建立的克隆性细胞系表达正常的核型从亲代（A）H1 hES 细胞系和（B）WLS-1C hiPS细胞系建立的克隆细胞系的代表性核型图，显示使用CloneR™建立的克隆性细胞系具有正常的核型。细胞在经克隆后，再传代5次，总传代数分别为45 （H1 hES 细胞系）和39（WLS-1C hiPS细胞系）。

图8. 使用CloneR™建立的克隆性细胞系有正常的生长速度克隆性细胞系与亲代细胞扩增速度相似。图示为（A）H1 hES细胞系和（B）WLS-1ChiPS细胞系的克隆（桔红色）和亲代细胞系（灰色）的比较。

CloneR™

相关推荐