碧云天生产的CellTiter-Lumi™ Plus发光法细胞活力检测试剂盒(CellTiter-Lumi™ Plus Luminescent Cell Viability Assay Kit),简称CTL Plus发光法细胞活力检测试剂盒或CTL Plus,是一种通过化学发光法测定细胞内ATP含量从而用于超高灵敏度、超宽线性范围定量检测活细胞数目的试剂盒。本试剂盒的性能达到甚至在有些方面优于国外同类产品。 本产品线性范围宽,96孔板中,在12个至10万个细胞范围内有良好的线性关系。不同细胞的检测数量上限会有显著不同。如果检测的细胞数量不超过3万,也可使用性价比更高但线性范围略窄的CellTiter-Lumi™发光法细胞活力检测试剂盒(C0065)。 本产品的性能达到甚至在有些方面优于国外同类产品。本产品的性能和用途与Promega公司的CellTiter-Glo® Luminescent Cell Viability Assay(简称CellTiter-Glo®或CTG)和CellTiter-Glo® 2.0 Assay(简称CellTiter-Glo®2.0或CTG2.0)基本相同,本产品的检测效果及与国外同类产品Competitor P及Competitor P2.0的检测效果比较参见图1,在发光强度和对于某些细胞的线性范围有显著的优势。 本产品发光强度高。对于相同的细胞样品,本产品的发光效果比国外同类产品Competitor P或Competitor P2.0强约40-100%,实测效果的差异会因细胞种类的不同有所不同,例如对于NIH3T3和HeLa细胞的检测,CTL Plus的发光效果比国外同类产品Competitor P或Competitor P2.0强约60-100%;而对于Jurkat细胞的检测,CTL Plus的发光效果则比国外同类产品Competitor P或Competitor P2.0强约40-50% (图1D)。 本产品检测灵敏度高,线性范围宽,可以在12个至10万个细胞范围内呈现良好的线性关系。使用本产品检测细胞数量仅为25个/孔时,发光强度可达空白孔的2倍左右。对于某些细胞,例如HeLa细胞等,CTL Plus有非常完美的线性范围,标准曲线的斜率在12-400个细胞和在12-100,000个细胞范围内基本相同(图1A、1B,斜率分别为43.434和43.890),但国外同类产品Competitor P标准曲线的斜率在12-400个细胞和在12-100,000个细胞范围内发生了非常显著变化(图1A、1B,斜率分别为29.493和20.765)。本产品与国外同类产品Competitor P、Competitor P2.0的检测效果比较参见图1。 本产品操作简单,读数稳定,检测速度快,完成检测仅需约10分钟。本产品比常见的MTT、alamarBlue、Calcein-AM、WST-1、CCK-8等其它细胞活力测定方法更加简单快捷。只需把试剂盒提供的单一即用型试剂CellTiter-Lumi™ Plus发光法检测试剂与培养细胞等体积混合,反应10分钟后即可进行化学发光检测。无需洗涤细胞,也无需更换或去除培养液。并且化学发光非常稳定,在反应开始后的10分钟内无显著变化,30分钟内的下降不超过10%。 本产品稳定性好。本试剂盒中的CellTiter-Lumi™ Plus发光法检测试剂稳定性好,反复冻融5次对检测效果基本无影响,反复冻融10次检测效果下降不超过10%。本产品4℃保存3天对检测效果无显著影响,4℃保存7天检测效果下降不超过10%。室温保存1天,仍可保留80%以上的检测效果。37℃保存1天,可保持60%以上的检测效果。本产品即使仅保留约50%的检测效果,仍可以满足各种常规检测。 本产品使用灵活便捷。本产品不仅适合少量样品的检测,也非常适合大量样品的高通量筛选(high-throughput screening)检测。 ATP,作为最重要的能量分子,在细胞的各种生理、病理过程中起着重要作用。ATP是细胞新陈代谢的一个重要指标,也是具有代谢活性细胞的重要标志性分子,并和活细胞数目成良好的线性关系。因此,ATP含量能很好地反应活细胞的数目,即本试剂盒可以通过测定ATP含量来进行细胞计数或检测细胞活力。 本试剂盒通过ATP检测细胞活力的原理参见图1。借助ATP依赖的萤光素酶催化的萤光素发光反应,ATP可以通过测定化学发光来进行定量。由于ATP含量能很好地反映活细胞的数目,而ATP含量和发光强度成正比,这样就可以简单地通过化学发光强度来计算出细胞活力或细胞数目。 对于96孔板,推荐使用100μl细胞培养液和100μl的检测试剂,总体积为200μl,此时本试剂盒每10ml可以进行100次检测。对于384孔板,推荐使用25μl细胞培养液和25μl的检测试剂,总体积为50μl,此时本试剂盒每10ml可以进行400次检测。也可以用其它体积的试剂进行检测,但细胞培养液和检测试剂体积的比例须为1:1。虽然有数据显示适当减少检测试剂的用量也很可能会得到较好的结果,但对于细胞数量偏多、细胞数量特别少或者重复性要求比较高的情况,建议按照推荐用量进行检测。 |